高压蒸汽灭菌的方法步骤及注意事项如下。加水并装人培养基。向灭菌锅内加水至水位标记高度，水过少易烧干，造成事故；水过多，则棉塞易受潮，引起霉菌污染。把培养基装人灭菌锅内，棉塞不能接触锅壁，上面要盖2层报纸或1层防水油纸，防止锅盖下面的冷凝水打湿棉塞；锅内的培养基必须排放有序，使蒸汽流通，否则容易灭菌不彻底。最后均匀拧紧锅盖上的螺丝，避免漏气。加热灭菌。这一步的关键是冷气排放要完全，较好的方法是当压力升至0．5兆帕时，打开放气阀缓慢放气，让压力降至零，再放气10～15分钟，当有大量蒸汽排出时，关闭放气阀升压灭菌。当升至所需压力时，开始计时，并调节火力大小，始终维持所需压力直至达到规定时间。
停止加热，缓慢减压。待压力自然下降到零时，打开放气阀，缓慢排出残留蒸汽，然后打开锅盖，取出灭菌物品。注意，如果选择人工排气降压，则排气不能太快，否则压力突然降低，会使母种培养基沸腾而溅到棉塞上，甚至把棉塞挤出，也可能造成装原种、栽培种的瓶或袋胀破。取出的母种培养基要趁热摆斜面，然后将原种和栽培种培养基搬入已消毒的冷却室。使用完毕后排出剩余水分。要使锅内保持干燥，若连续使用，应注意补足水分。
常压蒸汽灭菌锅即普通的土蒸锅一般常用的有圆形和方形两种。有些圆形土蒸锅是在普通大铁钢上套上一个圆形木桶或砌成砖围，砖围用水泥加固，顶上加盖密封，锅内装置托架。容量大时，常用导链进料出料。方形土蒸锅是在大铁锅上砌一个方形封顶式灭菌仓，其一侧开门进出原料，用木板或铁板密闭，仓内装置托架。
常压灭菌设备简单，造价低廉，灭菌室的容积一般较大适合大规模生产，但灭菌时间较长，培养基营养成分破坏较大，灭菌过程中培养基的pH值下降幅度较大常压蒸汽灭菌锅体积大，为使锅内气流通畅、热量均匀，常在顶部设一排气阀，并插人温度计，以便测定锅内温度，但需注意，锅内上部的温度高于下部，需要排冷空气，以免造成下面四角灭菌不彻底。
常压灭菌，一般温度只能达到℃，且密闭不严，因此灭菌时间需要长达10～－12小时，灭菌过程中还要注意补充锅内水量。常压蒸汽灭菌锅的设计直接关系到灭菌效果、燃料用量、使用效益、劳动强度和菌袋的污染率。设计是否合理最终反映在菌种场的经济效益上。目前常见的有常压蒸汽灭菌锅、高压蒸汽灭菌锅及自制的多样蒸汽灭菌锅。常压蒸汽灭菌锅容量大、投资少、经济实用，常用于原种培养基、栽培种培养基和栽培料的灭菌。其不足之处是灭菌所需时间长（需10小时以上），灭菌效果相对较差。常用的设备为各种常压灭菌灶。
设计常压灶时应注意：容量大小应根据生产规模来定；灶顶部最好制成拱圆形，这样冷凝水可沿灶的内壁下流而不会打湿棉塞；灶仓内要设层架结构，以便分层装人灭菌物；灶上应安装温度计，可随时观察灶内温度的变化；因灭菌时间长，常压灶要设计加水装置；灶仓的密闭程度要尽可能高，这样既可提高灭菌效果，又可节省燃料。
常压蒸汽灭菌方法步骤及注意事项如下：向铁锅内加足水，用于补水的小锅内也要加满水。将培养基按层次分别放人灭菌灶内。瓶或袋之间应留有空隙，不能装得太多太密，以保证锅内蒸汽流通，装好后用螺栓将灶门扣紧。加热升温时随时观察灶内温度，当温度上升到℃时，开始计时。注意：温度要持续在℃，并定时向铁锅内加开水，以防烧干，切勿加进凉水，否则影响灭菌效果。维持压力8－10小时或更长，视灭菌量及料袋的摆放情况而定；停止加火后焖6－8小时，待温度自然下降，取出灭菌物品，放入预先消毒了的冷却室中。
培养设备：培养室培养室是用来培养菌种的场所，为菌种生长提供适宜的温度、湿度和通气条件，使菌丝生长发育良好，常用于原种、栽培种的培养。培养室的大小和数量可根据生产规模而定，但必须符合以下要求。培养室要求清洁卫生、通风良好，并配备有调温设备。室内设置培养架，以便于检查杂菌和提高空间利用率。培养架的尺寸一般为架高2米左右，设5～7层，层距30～40厘米架宽50～70厘米，长度视房间大小而定培养室必须有良好的保温结构，门窗要能关闭紧密，否则温度不易控制；墙壁要相对厚一些，以便起到保温作用。在寒冷的地区最好使用双层门窗和夹层墙壁，夹层内填入保温材料。
培养室内应有调温设备，可根据具体条件选用电炉、火炉、空调等设备。另外，培养室还应配置培养架、温度计、湿度计等。大规模制种时，培养室应设有氧气测速仪、二氧化碳测速仪及通风设备等。培养箱培养箱也叫恒温箱，与培养室相比，体积较小。电热恒温培养箱温度可调，适合一般的实验室和小型菌种场，可以用于母种和原种的培养。菌种场最好配备恒温箱因为温度不适会导致菌丝生长缓慢，而且长势弱、老化快。
其他制种容器和用具：菌种瓶培养银耳菌种一般选用三角瓶、白色广口瓶或罐头瓶；菌种袋一般多采用低压聚乙烯或聚丙烯塑料袋，规格多用（－）毫米x（～）毫米x（0．04～0．06）毫米；接种工具常用的接种工具有接种勺和接种钩等；其他用具其他用具常用的还有烧杯、量筒、培养皿、酒精灯、试管、镊子、电炉、天平、温度计等。如果有条件，则应购置电冰箱、电热干燥箱、生物显微镜等。